绞股蓝皂苷A含量测定-KQ-800KDE使用

绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物，具有清肺化痰、补 气生津、健脾安神等功效，其化学成分复杂，主要包 括皂苷类、多糖类、黄酮类、氨基酸、微 量元素等多种成分，主要活性成分为皂苷类。 现代药理研究表明绞股蓝具有降血脂、抗动脉粥样硬 化等作用。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Agilent 1260 液相色谱( 配有 G1311C 型四 元梯度泵，G1329B 型自动进样器，G1316A 型柱温箱， G4212B 型 DAD 检测器; Agilent Technologies，美国) ; XP-205 电 子 天 平 ( 瑞 士 Mettler Toledo 公 司，感 量: 0．01 mg) ; 昆山舒美KQ-800KDE 超声仪( 中国昆山市超声仪器有限公司) ; Milli-Q 超纯水处理系统( 美国 Millipore) 。

1．2 试药

乙腈( 色谱纯，批号: 165741，美国 Fisher 公司) ; 实验室用水为超纯水; 绞股蓝皂苷 A 对照品 ( 批号: drk-1392-911223，成都德锐可生物科技有限公 司，含 量: 98． 0%) ; 人 参 皂 苷 Ｒb1 ( 批 号: 110704- 200318) ，人参皂苷 Ｒb3( 批号: 111686-200501) ，人参 皂苷 Ｒg1( 批号: 110703-200424) ，人参皂苷 Ｒd( 批号: 111818-201603) ，均由中国食品药品检定研究院提供;绞股蓝总苷分散片( 亚宝药业集团股份有限公司，批 号: 160702，160901，161101，规格: 每片含绞股蓝总苷 60 mg) ; 羟丙基纤维素( 国药集团化学试剂有限公司， 批号: 20151020) ; 羧甲基淀粉钠( 国药集团化学试剂 有限公司，批号: 20150311) ; 硬脂酸镁( 营口市第二制 药厂生产，北京市燕京制药厂分装，批号: 20000609) 。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱: Alltima C18色谱柱( 150 mm× 4．6 mm，5 μm) ; 流 动 相: 乙 腈-水 ( 31 ∶69) ; 流 速: 1．0 mL·min－1 ; 检测波长 210 nm; 进样体积: 20 μL; 柱 温为 30 ℃。样品进样前均经过孔径 0．22 μm 尼龙滤 膜滤过。

2．2 对照品溶液的制备

取绞股蓝皂苷 A 对照品 16．5 mg，精密称定，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇适量，超 声使溶解并用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为绞股蓝皂苷 A 储备液( 0．33 mg·mL－1 ) 。精密量取绞股蓝皂苷 A 储 备液 1，2，3，4，5 mL 于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释成浓 度约为 33，66，99，132，165 μg·mL－1 的绞股蓝皂苷 A 对 照品溶液。中间浓度的对照品溶液用作含量测定。

2．3 供试品溶液及阴性对照溶液的制备

取本品 20 片，精密称定，研细，精密称取粉末适量( 相当于绞股 蓝总苷 40 mg) ，置 10 mL 量瓶中，加甲醇适量，超声 10 min，甲醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分 别称取药品说明书中记录的辅料羟丙基纤维素、羧甲 基淀粉钠、硬脂酸镁各 0．1 g，置于 10 mL 量瓶中，同法 操作，配制不含绞股蓝总苷的阴性对照溶液，用于专属 性实验。

2．4 专属性实验和系统适应性实验

分别进样分析 阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液，结果见图 1，样品中其他成分和制剂辅料不干扰绞股蓝皂苷 A 的测定。理论板数按绞股蓝皂苷 A 计算不低于 3000。供试品溶液中主峰纯度检测阈值设定为 990，应符合 规定。

2．5 线性关系考察

取“2．2”项对照品溶液分别进 样，记录色谱图，以浓度( μg·mL－1 ) 为横坐标，峰面积 为纵坐标进行线性回归。得到线性方程为 Y = 6．31X－ 7．95，r = 1．000 0，说明绞股蓝皂苷 A 浓度在 32． 69 ～ 163．46 μg·mL－1 内与峰面积呈良好线性相关。将对 照品溶液逐级稀释，在信噪比( S /N) 约为 10．0 时测得 定量限为 0．098 μg·mL－1 ，在 S /N 约为 3．0 时测得检 测限为 0．033 μg·mL－1 。

2．6 精密度和稳定性实验

取中间浓度的对照品溶 液连续进样 6 次，记录绞股蓝皂苷 A 峰面积，峰面积 的 ＲSD 为 0．36%( n = 6) ，说明仪器精密度良好。对供 试品溶液( 批号: 160702) 分别于 0，2，4，8，12，24 h 进 样分析，峰面积的 ＲSD 为 0．85%( n = 6) ，表明供试品 溶液在 24 h 内稳定性良好。

2．7 重 复 性 实 验

取绞股蓝总苷分散片 ( 批 号: 160702) 制备供试品溶液 6 份，分别进样分析，计算得 到绞股蓝皂苷 A 含量，含量的 ＲSD 为 1．9%( n = 6) ，说 明方法的重复性良好。

2．8 加样回收率实验

精密称取样品( 批号: 160702， 平均片质量为 0．465 6 g) 粉末 6 份，分别精密加入绞股 蓝皂苷 A 储备液 1．5 mL，按照“2．3”项下供试品溶液 的制备方法制得各加样供试品溶液，进样测定，计算加 样回收率和 ＲSD，结果平均回收率为 97． 2%，ＲSD = 1．5%。见表 1。

2．9 样品含量测定

应用本文建立的方法对 3 批绞 股蓝总苷分散片进行测定，每个样品制备 3 份，取平均 值，测得批号为 160702，160901，161101 的样品中绞股 蓝皂苷 A 的含量分别为 4．05，3．88 和 3．21 mg·g－1 ，说 明绞股蓝总苷分散片生产工艺稳定。



3 讨论

3．1 检测波长的选择取绞股蓝皂苷 A 的对照品溶液

在 200～400 nm 范围内进行全波长紫外光谱扫描， 结果显示绞股蓝皂苷 A 呈现末端吸收，故选用 210 nm 作为绞股蓝皂苷 A 的检测波长。

3．2 提取方式的选择

分别考察 60%甲醇溶液、80% 甲醇溶液以及甲醇作为提取溶剂时提取效率，结果表 明，甲醇的提取效率最高，故选择甲醇为提取溶剂; 提 取时间分别考察超声 10，20 和 30 min，结果表明超声 提取 10 min 即可将样品中绞股蓝皂苷 A 提取完全。

3．3 流动相的选择

考察甲醇-水、 乙腈-水、乙腈-磷酸水等不同流动相，发现以甲醇作为 有机相时基线漂移相对严重，末端吸收干扰较强; 以乙 腈作为有机相时基线相对平稳，分离效果好，在水相中 加入磷酸溶液调节 pH 值，则对绞股蓝皂苷 A 的峰型 影响不大，所以选择乙腈-水为流动相。

3．4 专属性实验

本实验考察绞股蓝总皂苷中已有 含量测定研究报道的皂苷类成分，对绞股蓝皂苷 A 含 量测定的干扰，在本实验条件下，绞股蓝皂苷 A 与人参 皂苷 Ｒb1、人参皂苷 Ｒb3、人参皂苷 Ｒg1、人参皂苷 Ｒd 的分离度均大于 1．5，说明上述成分不会干扰绞股蓝皂 苷 A 的含量测定。 本实验采用高效液相色谱法建立绞股蓝总苷分散片中有效成分绞股蓝皂苷 A 含量测定方法，该方法操 作简便，结果准确可靠，可为绞股蓝总苷分散片以及含 有绞股蓝总皂苷的其他制剂的质量控制提供参考。