黑果小檗根薄层定性鉴别-KQ-250DE使用

新疆黑果小檗( Berberis heteropoda Schrenk) 为小 檗科( Berberidaceae) 小檗属( Berberis L. ) 植物，黑果 小檗根为黑果小檗的干燥根。别名: 刺黄柏。维名: “Zirlek yiltizi”，即“兹力克伊力提子”。根据《新疆 植物志》( 1999 年版) 记载，黑果小檗因其果实成熟 时呈紫黑色而得名。分布于新疆各地，国外蒙古及哈 萨克斯坦也有分布。

1 材料与试药

分析天平( MettLer － TeLedo) 、超声波清洗仪( KQ-500DE，昆山舒美超声仪器有限公司) 、水浴锅、冷凝 管、铁架台、铁夹、量筒、250 mL 圆底烧瓶、蒸发皿、吸 量管、洗耳球、100 μL 微量进样针、半自动点样仪( CAMAG LINOMAT 5) 、薄层色谱数码呈像系统( CAMAG ＲEPＲOSTAＲ 3) 、双槽展开缸( 20 cm × 10 cm) 、硅胶 G 板、硅胶 GF254 板、H 薄层板、烘箱、0. 22 μm 滤膜。 新疆黑果小檗根于 2017 年 12 月采自乌鲁木齐市 东白杨沟，经由新疆医科大学药学院生药学教研室帕 丽达·阿布利孜教授鉴定为小檗科小檗属植物黑果小 檗( Berberis heteropoda Schrenk) 的 根。室 温 阴 干，粉 碎，过 80 目筛，备用。盐酸小檗碱( B21449 － 20 mg， 上海源叶生物科技有限公司) 、盐酸巴马汀( B21433 － 20 mg，上海源叶生物科技有限公司) 、阿魏酸( B20007 － 20 mg，上海源叶生物科技有限公司) 、氨水、正丁 醇、乙酸乙酯、甲酸、水、甲苯、甲醇、异丙醇、三氯甲烷、 醋酸、95% 乙醇、0. 4% H2 SO4，实验所用试剂均为分析 纯。

2 方法与结果

2. 1 溶液配制

2. 1. 1 对照品溶液的制备

精密称取盐酸巴马汀、阿魏酸、盐酸小檗碱对照 品，分别置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解制得浓度为 0. 2 mg /mL 的对照品溶液，过0. 22 μm 的滤膜除杂，贮 于 4 ℃冰箱备用。

2. 1. 2 供试品溶液的制备

分别称取黑果小檗根皮、根木质部粉末各 8 份，每 份 5 g，置 50 mL 锥形瓶中，分别取其中 4 份加入 10 倍 量的 0. 4% H2 SO4、95% 乙醇、甲醇、蒸馏水 50 ℃、超声 提取两次，每次提取 1 h; 另取 3 份加入 10 倍量的 95% 乙醇、甲醇 80 ℃、蒸馏水回流提取 2 次，每次提取 2 h; 另取一份加入 0. 4% H2 SO4 溶液的样品冷浸提取 2 次，过滤合并滤液，挥干溶剂，得不同溶剂提取物浸膏， 称重。精密称取 100 mg 不同溶剂提取物浸膏，分别置 于 5 mL 容量瓶中，加甲醇溶解、稀释至刻度，摇匀得一 定浓度的供试品溶液，过 0. 22 μm 滤膜，过滤除杂，贮 于 4 ℃冰箱冷藏，备用。各样品称样量见下表 1。

2. 1. 3 混合对照品的制备

精密吸取 2. 1. 1 项下对照品溶液各 1 mL，置于 5 mL 容量瓶中，摇匀得混合对照品溶液，过 0. 22 μm 滤 膜，过滤除杂，贮于 4 ℃冰箱，备用。

2. 2 TLC 方法的建立

2. 2. 1 展开系统的考察

分别吸取 2. 1. 1 项下混合对照品溶液和 2. 1. 2 项 下供试品溶液各 2 μL，点于同一薄层板上，以正丁醇 － 乙酸乙酯 － 甲酸 － 水( 3∶ 5∶ 1∶ 1) 、甲苯 － 乙酸乙酯－ 甲醇 － 异丙醇 － 氨水( 6∶ 3∶ 2∶ 1. 5∶ 0. 5) 、三氯甲烷 － 甲醇 － 水( 15∶ 7. 5∶ 2) 、三氯甲烷 － 甲酸 － 水( 6∶ 3∶ 0. 8) 、氯仿 － 甲醇 － 氨( 7. 5∶ 2∶ 0. 5) 、正丁醇 － 冰乙酸 － 水( 2∶ 0. 5∶ 1) 、氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 5∶ 4∶ 1) 、氯 仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 5∶ 5∶ 1) 、甲苯 － 乙酸乙酯 － 异 丙醇 － 甲醇 － 氨水( 6∶ 3∶ 1. 5∶ 1. 5∶ 0. 8) 9 种不同展开 系统展开，取出，晾干，置于紫外 366 nm 下检视。通过 图中斑点数目、分离度和拖尾情况确定最佳展开系统， 检视结果以斑点数目多、分离度好、基本无拖尾情况者 为佳。其中氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 5∶ 5∶ 1) 、氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 5∶ 4∶ 1) 斑点较清晰，所以选择展开 系统氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸为最佳展开系统，但需调 整展开剂的比例以达到最佳的色谱展开条件。

2. 2. 2 不同展开剂比例的考察

分别吸取 2. 1. 1 项下供试品溶液和 2. 1. 3 项下混 合对照品溶液各 2 μL，点于同一薄层板上，以氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 4∶ 4∶ 1) 、氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 4 ∶ 4∶ 1. 5) 、氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 4∶ 4∶ 2) 、氯仿 － 乙 酸乙酯 － 甲酸( 4∶ 4. 5∶ 1. 5) 4 种不同展开比例展开，取 出，晾干，置于紫外 366 nm 下检视。展开剂氯仿 － 乙 酸乙酯 － 甲酸比例为 4∶ 4. 5∶ 1. 5 时展开效果较好，斑 点清晰，分离度好，故选择展开剂氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲 酸比例为 4∶ 4. 5∶ 1. 5。

2. 2. 3 点样量的考察

分别吸取 2. 1. 3 项下对照品混合溶液 1、2、3 μL 及 2. 1. 2 项下供试品溶液 1、2、3 μL 点样于同一薄层 板上，以最优展开系统为条件，展开，取出，晾干，置于 紫外 366 nm 下检视。结果发现，点样量为 1 μL 时，斑 点清晰明显、斑点间的分离效果也最好，当点样量大于 1 μL 时，斑点之间分离效果不好，不能保证各组分完 全分离，故确定最佳点样量为 1 μL。

3 讨论

供试品制备过程中，以甲醇( 化学纯) 为溶剂，因为供试品的甲醇溶液在薄层色谱条件下较稳定并且有 较好的溶解度，因此确定样品溶剂为甲醇溶液。本实 验确定以氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 4∶ 4. 5∶ 1. 5) 为展开 系统，展开温度为 25 ℃，薄层色谱法选择硅胶 GF254 板，点样量为 1 μL，分别于 366 nm、254 nm 进行检视， 其中盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和阿魏酸斑点清晰、分离效果好。