浅谈树脂分离纯化工艺研究！

博落回[Macleaya cordata（Willd）R.Br.]是罂粟科博 落回属多年生草本植物，全草入药，在我国主要集中分 布于江苏、浙江、云南、贵州、湖南、湖北、广西、广东及台 湾等地区。博落回富含生物碱，至今已被分离并鉴定 的单体生物碱达74个，其中含量最高且生物活性较强的 为苯并异喹啉类生物碱，主要包括血根碱、白屈菜红碱、 原阿片碱和别隐品碱等 。其中，血根碱具有明显的抗 菌、抗肿瘤以及保肝护肝等药理活性 。在欧美和日 本等发达国家，血根碱常作为抗菌药物的替代品被广泛 用于畜牧业及鱼类养殖。目前，我国对于高纯度的 血根碱尚无便捷、高效的规模化分离纯化方法。

1 材料

1.1 仪器

1260 型高效液相色谱（HPLC）仪（美国 Agilent 公 司）；APPS10D型制备液相色谱仪、Φ15 mm型GCC可压 缩玻璃柱（苏州利穗科技有限公司）；ME215S型电子天 平、PB-10型pH计（德国Sartorius公司）；MP2002型电子 天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；N-1001型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；SHZ-82 型恒温振荡 器（金坛市富华仪器有限公司）；DZF型电热恒温真空干燥箱（上海迈捷实验设备有限公司）；Simplicity UV型超 纯水机（德国Millipore公司）；KQ-250E型医用超声波清 洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

血根碱对照品[本实验室自制，批号：20170501，纯 度：97.1％（按HPLC测定、归一化法计算）]；CM-FF型弱 阳离子交换树脂、SP-HP 型强阳离子交换树脂[博格隆 （上海）生物技术有限公司]；CGC100×4型弱阳离子交换 树脂、PCG600F型反相树脂、PCG900F型反相树脂[漂莱 特（中国）有限公司]；S40型强阳离子交换树脂（苏州赛 分科技有限公司）；PIPO-02型大孔吸附树脂（广州牌牌生物科技有限公司）；SP50型强阳离子交换树脂（苏州知 益微球科技有限公司）；C18制备级填料（75 μm，日本 Cosmosil 公司）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯， 水为纯净水。

1.3 药材

博落回药材购自湖南，经苏州大学药学院陆叶副教 授鉴定为罂粟科植物博落回（Macleaya cordata）的果荚。

2 方法与结果

色谱柱：Cosmosil C18-R-Ⅱ（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.2％醋酸溶液（25 ∶ 75， V/V）；流速：1 mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；进 样量：20 μL。在该色谱条件下，血根碱与相邻峰的分离 度均大于1.5，理论板数大于5 000（图略）。精密称定血根碱对照品 12.86 mg，置于 50 mL 量瓶中，加入甲醇适量，超声（功 率：250 W，频率：40 kHz，下同）使其完全溶解后定容，摇 匀，即得。经0.45 μm微孔滤膜过滤，制得系 列质量浓度的线性对照品溶液。取上述稀释溶液与原 未经稀释的对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分别进 样测定。以血根碱质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰面 积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：y＝ 101.07x－398.04（r＝0.999 2，n＝3）。结果表明，血根碱 质量浓度在25.72～257.2 μg/mL范围内线性关系良好取已知含量的博落回提取物 样品 12 mg，共 6 份，精密称定，分别加入质量浓度为 1.528 mg/mL 对照品溶液（按“2.1.2”项下方法制备）2 mL，记录峰面积，按标准曲线法计算 含量并计算加样回收率。结果，平均加样回收率为98.2％（RSD＝1.06％，n＝6），表明方法准确度良好。

3 讨论

在已往相关研究中，对博落回生物碱的分离提取多 针对的是生物总碱混合物 ，而对于其单体生物碱的分 离纯化则鲜见报道。离子交换树脂具有成本低、性能稳 定、分离速度快、环境污染少、可再生和反复使用的优 势，广泛应用于化工生产、食品工业、制药工业和环保等 领域。本研究首次采用以琼脂糖为基质的软胶 CM-FF型弱阳离子交换树脂对博落回提取物进行分离 纯化，并以反相C18制备柱进行脱盐及进一步纯化，最终 得到纯度为97％的血根碱产物，纯化收率为71％。该工 艺稳定高效，为血根碱的开发和应用研究奠定了基础。