梧桐籽成分提取工艺的浅析

梧桐籽，即梧桐科植物梧桐树所结的种子，大小 似花椒，皮皱。梧桐籽，可入食，亦可入药。据《本草 纲目》记载，“梧桐籽，气味甘平，无毒”，具有“顺气、 和胃、消食”的功能。随着人们对营养保健的重 视程度逐年提高，以种子为原料进行的生理活性研 究受到越来越多研究者的关注。研究表明，梧桐籽 中有效成分具有激活内源性凝血途径，促进血小板 凝集 的 作 用，缓解 鼻 出 血，缩短伤口出血时间，抑制胆碱酯酶进而降低血压等功效。此外， 在中医角度上，梧桐籽还具有行气健脾、润肺、 解毒、收疮生肌、清热、通小便等功效。由 此可知，梧桐籽既能在一定程度上满足人体对常规 营养物质的需求，又能表现一定的生物活性，如提高 免疫力、延缓氧化衰老等。

梧桐籽由中韩食品生物技术研究所（青岛农业 大学）提供；ＤＰＰＨ 由 Ｓｉｇｍａ中国有限公司提供；无 水乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯由莱阳市康德化工 有限公司提供；其余试剂均为国产分析纯。

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试验以梧桐籽作为研究对象，经过挑 选、清 洗、 烘干、去壳、干燥、粉碎、密封、冷藏等工序制成初级 样品，以备后续之用。

参照 Ｃｈｅｎｇ、Ｍａｒｌａ、Ｃｈｏｉ等的 研 究，对 ＤＰＰＨ 清除率的试验步骤进 行 设 计，以 ＶＥ 作为 参 照，并测定样品。其计算如下： ＤＰＰＨ 清除率（％）＝ ［Ａ对照 －（Ａ样品 － Ａ样品 参 照 ）］／Ａ对照 （１） 式中：Ａ 为吸光值（ＡｂｓｏｒｂａｎｃｅＶａｌｕｅ）的代指。

参照 Ａｌ－Ｊｕｈａｉｍｉ、Ｗａｎｉ、Ｂｈｕｉｙａ等的 研究，对梧桐籽抗氧化活性成分进行单因素试验。

以水、无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯等提取溶剂， 在料液比１∶１０、提取温度５０ ℃、提取时间３０ｍｉｎ 的条件下，以 ＤＰＰＨ 清除 率 为 指 标，将 清 除 率 高 的 样品所用的提取溶剂视为本试验的最佳提取溶剂。

用１．４．１所确定的最佳提取溶剂，设置２０、３０、 ４０、５０、６０ｍｉｎ为提取时间，在料液比１∶１０、提取温 度５０ ℃的条件下，以 ＤＰＰＨ 清除率为指标，将清除 率高的样品所用的提取时间视为本试验的最佳提取 时间。

在１．４．１所确定的最佳 浸 提 溶 剂、１．４．２所确 定的最佳提取时间进行提取，在提取温度５０ ℃下， 以１∶４、１∶６、１∶８、１∶１０、１∶１２、１∶１４为提取料 液比，以 ＤＰＰＨ 清除 率 为 指 标，将 清 除 率 高 的 样 品 所在的料液比视为本试验的最佳料液比。 １．４．４ 最佳提取温度的确定 在１．４．１所确定的最佳 提 取 溶 剂、１．４．２所确定的最佳提取时间、１．４．３所确定的最佳料液比 下 进行提 取，以 ３０、４０、５０、６０、７０ ℃ 为 提 取 温 度，以 ＤＰＰＨ 清除率为指标，将清除率高的样品所在的提 取时间视为本试验的最佳提取时间。

不同浸提溶剂下所得梧桐籽提取 液对 ＤＰＰＨ 清除 率 存 在 差 异。不同溶剂提取条件 下，梧桐籽提 取 液 ＤＰＰＨ 清除 率 的 大 小 关 系 为：乙 酸乙酯＞石油醚＞水＞无水乙醇。由此可知，乙酸 乙酯是此次试验设计条件下的最佳提取溶剂，梧桐 籽乙酸乙酯提取液对 ＤＰＰＨ 的清除率为６０．９３％。 ２．１．２ 提取时间对 ＤＰＰＨ 清除率的影响。不同提取时间下，梧桐籽乙酸乙酯提取 液 ＤＰＰＨ 清除率的大小关系为：５０ｍｉｎ＞４０ｍｉｎ＞ ３０ｍｉｎ＞６０ｍｉｎ＞２０ｍｉｎ；随着提取时间的增加，梧 桐籽乙酸乙 酯 提 取 液 对 ＤＰＰＨ 的清 除 率 出 现 先 升 高后降低的趋势，在５０ｍｉｎ时，梧桐 籽 乙 酸 乙 酯 提 取液对 ＤＰＰＨ 的清除率达到最高。由此可知，乙酸 乙酯作为提取溶剂时，最佳提取时间为５０ｍｉｎ。此 时，梧桐籽提取液对 ＤＰＰＨ 的清除率为６５．３０％。以 乙 酸 乙 酯 为 最 佳 提 取 溶 剂，５０ ｍｉｎ为最佳提取时间时，不同料液比条件下，梧桐籽 提取液对 ＤＰＰＨ 清除率的影响存在差异。不 同 料 液比下，梧桐籽乙酸乙酯提取液对 ＤＰＰＨ 清除率的 大小关系为：１∶６＞１∶４＞１∶８＞１∶１０＞１∶１２＞ １∶１４。随着料液比的减小，梧桐籽乙酸乙酯提取液 对 ＤＰＰＨ 清除率呈现先升高再降低的趋势，在料液 比１∶６时达到最高；综上所述，通过单因素试验，梧桐籽抗氧化活性 成分的最佳提取工艺为：提取溶剂乙酸乙酯，提取时 间５０ｍｉｎ，料液比１∶６，提取温度６０ ℃。

３ 结果与讨论

３．１ 结果

（１）本文 通 过 ＤＰＰＨ 清除 试 验，对 梧 桐 籽 抗 氧 化活性物质提取工艺中的提取溶剂、提取时间、料液 比、提取温度等因素进行了确定。单因素试验结果 显示，最佳提 取 试 剂 为 乙 酸 乙 酯、最佳提取时间为５０ｍｉｎ、最 佳 料 液 比 为 １∶６、最 佳 提 取 温 度 为 ６０ ℃。响应面优化试验结果显示，梧桐籽抗氧化活性 成分最佳提取工艺条件为：提取溶剂乙酸乙酯、提取 时间４５ｍｉｎ、料液比１∶５、提取温度５５ ℃，与单因 素试验结果基本相吻合。
（２）在响应面优化的最佳提取工艺下，梧桐籽提 取液对 ＤＰＰＨ 的清除率达到了９４．２５％。与单因素 各试验组梧桐籽提取液对 ＤＰＰＨ 的清除率相比，经 过响应面优 化 的 梧 桐 籽 提 取 液 对 ＤＰＰＨ 的清 除 率 有所增强。由此可知，响应面优化的结果符合优化 的目的。
（３）将 最 优 提 取 工 艺 条 件 下 梧 桐 籽 提 取 液 的 ＤＰＰＨ 清除效果与维生素 Ｅ（ＶＥ）进行比较发现，最 佳提取工艺下，最优提取工艺条件下梧桐籽提取液 的 ＤＰＰＨ 清除效果相当于１４７．３９ｍｇ／Ｌ 的 ＶＥ 的 ＤＰＰＨ 清除效果。经过测定，最佳提取工艺条件下， 梧桐籽乙酸乙酯提取物中主要抗氧化成分中含量最 高的为总黄酮，其次是总多肽、总多酚、总氨基酸。

３．２ 讨论

本研究发现，浓度为２００ｍｇ／ｍＬ的梧桐子乙酸 乙酯提取物对 ＤＰＰＨ 的清除 率 达 到 了９４．２５％，其 对 ＤＰＰＨ 清除效果相当于１４７．３９ｍｇ／Ｌ 的 ＶＥ 乙 酸乙酯溶液，梧桐籽乙酸乙酯提取物中主要抗氧化 成分总黄酮的含量最高。李现日等研究表明，金 花葵花乙酸乙酯相中黄酮含量与抗氧化活性存在显 著的相关关 系（ｐ ＜０．５）。华艳 宏等研 究 发 现， 不同有机溶剂对藜麦种子的提取物中含有总黄酮、 总多酚等抗氧化活性成分，且提取物对 ＤＰＰＨ 均存 在一定的清除作用。李治明等发现，皇后葵果实 乙醇提取物中含有总黄酮，且该物质含量与 ＤＰＰＨ 清除能力之间呈正相关性。吴双等研究表明，海 滨锦葵种子乙酸乙酯提取物中含有黄酮，且该提取 物对 ＤＰＰＨ 具有清除活性。据此，推测梧桐子乙酸 乙酯提取物 对 ＤＰＰＨ 的清 除 活 性 与 该 提 取 物 中 存 在一定的总黄酮物质存在有关，且有待于对梧桐子 乙酸乙酯提取物中总黄酮含量及该提取物对 ＤＰＰＨ 清除能力之间相关性的强弱进行确认。