测定苯唑嗪胶囊中主成分及有关物质的含量

苯唑嗪（研发代号：Q808）化学名为 6-（4-氯苯氧 基）-四唑并酞嗪，是一种新的抗癫痫药物，具有增 强脑内核团自发性抑制性突触后电流（sIPSC）频率、增 加γ-氨基丁酸（GABA）含量的作用，其保护指数（PI）优 于卡马西平和卢非酰胺，在整体和离体癫痫模型中均具 有较强的抗癫痫作用，与传统抗癫痫药物苯妥英钠、托 吡酯相比，具有较强的抗惊厥作用且神经毒性较低。 以苯唑嗪为原料制成的苯唑嗪胶囊目前已获得临床试 验批件，正在进行临床试验，在国内外尚未有关于该药 质量标准的研究报道。

1 材料

1.1 仪器

LC-2010AHT型HPLC仪，包括二极管阵列检测器、 色谱工作站（日本岛津公司）；KQ-2200型超声波清洗仪 （昆山舒美超声仪器有限公司，文中采用参数为功率：250 W，频率：40 kHz）；BT125D 型十万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.2 药品与试剂

苯唑嗪对照品（批号：20140331，纯度：＞99.9％）、5- 氯四唑并酞嗪对照品、6-（2，4-二氯 苯氧基）-四唑并酞嗪对照品均由延 边大学药学院药物化学教研部制备；苯唑嗪胶囊（吉 林省中医药科学院制剂室，批号：20140521、20140522、20140523，规格：0.15 g）；乳糖（美国 Foremost Farms 公 司）；交联聚维酮（PVPP，国药集团化学试剂有限公司）； 微晶纤维素（湖州展望药业有限公司）；聚乙烯己内酰 胺-聚醋酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物（Soluplus®，德国 巴斯夫有限公司）；甲醇、乙腈均为色谱纯，水为纯净水， 其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色 谱 柱 ：Inertsil ODS- 2 C18（250 mm × 4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈-水（55∶45，V/V）；检测波长：223 nm； 柱温：25 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：20 µL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

精密称取苯唑嗪对照品10.04 mg， 置于50 mL量瓶中，加乙腈超声（功率：250 W，频率：40 kHz，下同）10 min；取出，放冷，稀释至刻度，摇匀，精密 量取 5 mL，置于 25 mL 量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇 匀，制成每1 mL中含苯唑嗪40.16 μg的溶液，作为对照 品溶液。

2.2.2 供试品溶液

精密称取苯唑嗪胶囊内容物适量 （约相当于苯唑嗪10 mg），置于50 mL量瓶中，用乙腈超 声 10 min；取出，放冷，稀释至刻度，摇匀，精密量取 5 mL，置于25 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 系统适用性溶液

精密称取杂质 1、杂质 2 对照 品各5 mg，置于10 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得系 统适用性贮备液；精密称取苯唑嗪对照品 10.06 mg，置 于50 mL量瓶中；精密移取系统适用性贮备液1 mL，置 于上述50 mL量瓶中，定容，摇匀，得系统适用性溶液。

2.2.4 空白辅料溶液

按样品处方精密称取除苯唑嗪 外的空白辅料适量，再按“2.2.2”项下方法进行制备，即 得空白辅料溶液。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液（批号：20140523）、系统适用性溶液及空白辅料溶液各20 μL， 按“2.1”项下色谱条件进样分析。结果，杂质1、杂质2与 苯唑嗪的分离度＞5，其余各峰之间的分离度＞1.5，主峰 拖尾因子为1.14～1.16，理论板数以主成分峰计＞5 000， 详见图1。


份加入30％过氧化氢溶液5 mL，室温放置3 h，加乙腈稀 释至刻度，摇匀，作为氧化破坏溶液；1份加入5 mL蒸馏 水，70 ℃水浴加热3 h，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为高 温破坏溶液；1 份加入乙腈 5 mL，使溶解，置于 4 500 lx 条件下照射18 h，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为光照破 坏溶液。精密量取上述 5 种溶液及未破坏样品溶液各 20 µL，分别注入色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进样测 定，记录其色谱图。

2.4 方法专属性考察

取苯唑嗪胶囊10粒（批号：20140523）内容物研细， 精密称取约5 mg，共5份，分别置于25 mL量瓶中：1份 加入1 mol/L的盐酸溶液 5 mL，55 ℃水浴加热3 h，用1 mol/L的氢氧化钠溶液中和，调节至中性，加乙腈稀释至 刻度，摇匀，作为酸破坏溶液；1份加入0.1 mol/L的氢氧 化钠溶液 5 mL，静置3 h，用1 mol/L的盐酸溶液中和，调 节至中性，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为碱破坏溶液；

3 讨论

苯唑嗪胶囊是针对癫痫治疗研发的化学药品1.1类 新药 ，目前，相关研究已对苯唑嗪原料药中的杂质进行了分离鉴定及初步的测定 ，但并未对其进行系统的 质量检查方法研究，特别是对苯唑嗪胶囊，目前国内外 尚无相关研究的文献报道。本试验采用HPLC法，对苯 唑嗪胶囊主成分的含量及有关物质进行了深入研究，以 更好、更全面地控制该制剂的质量。 在色谱条件优化过程中，笔者主要考察了流动相组 成以及检测波长对分离效果的影响。在流动相组成中， 分别比较了甲醇-水和乙腈-水为流动相的分离效果，结 果表明，选择乙腈-水（55∶45，V/V）为流动相时，主成分 与各杂质间的分离效果良好（分离度＞2），保留时间（杂 质1：5.355 min；主成分：12.224 min；杂质2：18.088 min） 合适，且主成分与杂质均能满足分析要求。采用二极管 阵列检测器对检测波长进行筛选，发现各成分在223 nm 波长处有最大吸收，且灵敏度较高。故选择223 nm作为 本研究的检测波长。