桂枝茯苓透皮贴剂主要成分分析-KQ5200DE应用！！

桂 枝 茯 苓 丸 出 自 张 仲 景 的 《金 匮 要 略》，由 桂 枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、芍药等五味中药组成，具有 活血，化瘀，消癥之功效，是目前临床治疗妇科血 瘀证的首 选 药 物 之 一。透皮贴剂具有血药浓度平 稳持久，不 良 反 应 小，用 药 次 数 少，使 用 方 便 等 优 点。中医认为，脐中为通五 脏 而 真 神 来 往 之 门。 脐部周围皮肤角质层较薄，是经皮给药的理想给药 部位之一。桂枝茯苓丸方中桂枝和牡丹皮含有挥 发性有效成 分 肉 桂 酸 和 丹 皮 酚 等，容 易 透 皮 吸 收， 并且能促进方中其他有效成分如芍药苷和苦杏仁 苷的吸收。因此，将桂枝茯苓丸制成外敷脐部的 透皮贴剂，具有独特的优势。本文报道桂枝茯苓透 皮贴剂的含量及体外释放度测定方法，旨在为该产 品的质量控制提供依据。

１ 仪器与试药

１．１ 仪器

Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪（美国安 捷伦公司，包括 Ｇ１３７９Ａ 在线脱气机，Ｇ１３１１Ａ 四元 梯度 泵，Ｇ１３１３Ａ 自 动 进 样 器，Ｇ１３１６Ａ 柱 温 箱， Ｇ１３１５Ｂ二极管阵列检测器，Ａｇｉｌｅｎｔ色谱工 作 站）； ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５ μｍ）；ＫＱ５２００DE型数控超声波清洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）；ＭＥＴＴＬＥＲ ＴＯＬＥＤＯＡＧ１３５十 万分之一电子天平（瑞士）；ＤＫ－Ｓ２４电热恒温水浴 锅（上海精宏实验设备有限公司）

１．２ 试药

芍药苷对照品（批号１１０７３６－２０１４３８）， 丹皮酚 对 照 品（批 号 １１０７０８－２０１４０７），肉 桂 酸 对 照 品（批 号 １１０７１０－２０１０１６），均购自中国食品药品检 定研究院；桂 枝 茯 苓 透 皮 贴 剂（自 制，批 号１６０３０５，１６０３０６，１６０３０７，１６０３１４，１６０３１５，１６０３１６）；甲 醇、磷 酸为分析纯，其余试剂均为色谱纯，水为超纯水。

２ 方法与结果

色谱柱：ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８ （２５０ｍｍ×４．６ ｍｍ，５μｍ）；流 动 相：乙 腈 （Ａ）－ ０．１％磷酸水 溶 液（Ｂ）；梯 度 洗 脱 程 序（０→１７ ｍｉｎ， １４％～４５％Ａ；１７→２４ｍｉｎ，４５％～４４％Ａ；２４→２６ ｍｉｎ，４４％～１４％Ａ；流 速：１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１）；柱 温： ３０℃；检测波长：２３０ｎｍ，２７４ｎｍ；进样量５μＬ。在 该色谱条件 下，贴 剂 中 芍 药 苷、肉桂酸和丹皮酚色 谱峰与其他成分色谱峰分离良好，分离度符合要求 （Ｒ＞１．５），结果见图１。

取 芍 药 苷、肉 桂 酸、丹皮酚对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并定 容至刻度，摇匀，制成芍药苷４０２μｇ·ｍＬ－１、肉桂酸 ８．０８μｇ·ｍＬ－１、丹皮酚２００μｇ·ｍＬ－１的混合对照品 溶液，备用。取１／９贴贴剂，揭除防 黏纸，剪碎，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇５０ｍＬ， 精密称 定，超 声 处 理（功 率２５０ Ｗ，频 率 ４０ｋＨｚ）１ ｈ，放冷，再精 密 称 定，用 甲 醇 补 足 减 失 质 量，摇 匀， 滤过，取续滤液，备用。按桂枝 茯苓透 皮 贴 剂 处 方 及 制 备 工 艺，分 别 制 成 空 白 贴 剂、缺赤芍、桂 枝 和 牡 丹 皮 的 阴 性 样 品，按“２．１．３” 项下方法制成空白贴剂及阴性样品溶液，备用。在 与对照品色谱相同的保留时间处，贴剂基质及阴性 对照无干扰。取同一批贴剂６片，按“２．１．３” 项下方法平行制备６份供试品溶液，每份按“２．１．１” 项下色谱条件进样测定。结果芍药苷、肉桂酸、丹皮 酚含量的 ＲＳＤ分别为２．１８％，２．８７％，４．１３％。表明 方法重复性较好。取１／９贴空白贴剂共６份，揭 除防黏纸，剪碎，置于５０ｍＬ量瓶中，分别精密吸取 混合对照品 溶 液，加 入 其 中，并 用 释 放 介 质 稀 释 定 容，进样２０μＬ，按“２．１．１”项下色谱条件，测定峰面 积，并计算回收率及 ＲＳＤ。结果芍药苷的平均回收 率为９８．８６％，ＲＳＤ 为２．５４％；肉 桂 酸 的 平 均 回 收 率为１０３．２８％，ＲＳＤ为１．７０％；丹皮酚的平均回收 率为９９．３３％，ＲＳＤ 为１．１８％，表明该方法准确度 良好。

３ 讨论

为使各成分均有较好的灵敏度和响应值，本文 采用双波长切换法同时测定芍药苷、肉桂酸以及丹 皮酚这３个指标成分。流动相的选择主要参考前期所做的工作。芍 药 苷 是 双 环 单 萜 类，极 性 很 大， 水溶性较好，脂 溶 性 差，肉桂酸和丹皮酚是极性较 小的挥发性物质，分别含有羧基和酚羟基。曾用乙 腈－水和甲醇－水系统进行试验，结果 显 示 乙 腈－水 系 统对供试品有较好的分离性能，且色谱峰保留时间 较短。但乙腈－水系统仍有拖尾现象，且未达到基线 分离。以醋酸调节水相ｐＨ 后可以改善分离度和拖 尾现象，但醋 酸 在 低 波 长 吸 收 干 扰 较 大，不 利 于 定量分析，故最 终 选 用 乙 腈－０．１％磷 酸 水 溶 液 为 流 动 相，采用梯度 洗 脱，优 化 洗 脱 条 件，使 芍 药 苷、肉 桂 酸、丹皮酚与其他成分分离良好且分析时间较短。