KQ-300DE的使用！小青龙颗粒中9种成分的含量分析

小青龙颗粒由麻黄、桂枝、白芍、干姜、细辛、炙甘草、法 半夏、五味子 8 味中药组成，具有解表化饮、止咳平喘的功 效，用于风寒水饮、恶寒发热、无汗、喘咳痰稀。上述 8 味 药材均收录于中国药典 2015 年版，其中麻黄具有发汗散寒、 宣肺平喘、利水消肿的功效，标准中以盐酸麻黄碱和盐酸伪 麻黄碱的总量作为麻黄的定量指标;桂枝具有发汗解肌、文通经脉等功效，标准中以桂皮醛含量作为定量指标;细辛、干姜均具有散寒、温肺化饮等作用，标准中以挥发 油含量作为这两味药材的定量指标，此外细辛中的细辛脂 素，干姜中的 6-姜辣素含量也分别作为质量控制指标;白芍 具有养血调经、柔肝止痛等功效，主要活性成分为芍药苷; 炙甘草为甘草的的炮制品，具有补脾和胃、益气复脉的功能，含量同甘草药材，测定甘草苷和甘草酸的量;法半夏为 半夏经甘草、生石灰炮制而得，用于咳痰多喘、痰 饮 眩 悸 等，含量测定指标药典中并未作出规定。半夏药典采用电 位滴定法测定琥珀酸含量作为定量指标，文 献 运 用 了 HPLC 法测定出法半夏中的盐酸麻黄碱、甘草苷、甘草酸铵 和琥珀酸的含量较高;五味子具有收敛固涩、益气生津、补肾 宁心的功能，标准以五味子醇甲含量控制其质量

1 仪器与试药

Agilent1290 Infinity 型超高效液相色谱仪(美国安捷伦 公司)，包括二元泵，DAD 检测器，自动进样器;电子天平: XP205 型 (d = 0．01 mg)，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公 司;KQ-300DE 型数控超声波清洗器(昆山舒美超声仪器有 限公司);Milli-QAcademic 超纯水仪(美国默克密理博)。 琥珀酸对照品(批号:110896-201602，纯度:99．9%)、盐 酸麻黄碱对照品(批号:171241-20150，纯度:99．8%)、盐酸伪 麻黄碱对照品(批号:171237-201510，纯度99．8%)、芍药苷对 照品(批号:110736-201741，纯度95．7%)、甘草苷对照品(批 号:111610-201106，纯 度93．7%)、甘草酸铵对照品 ( 批 号: 110731-201619，纯 度 93%)、桂 皮 醛 对 照 品( 批 号: 110710- 201720，纯 度 98．7% )、6-姜 辣 素 对 照 品 ( 批 号: 111833- 201705，纯 度96．8% )、五味子醇甲对照品 ( 批 号: 110857- 201714，纯度99．9%) 均购自中国食品药品检定研究院。法 半夏、麻黄、白芍、炙甘草、桂枝、干姜、五味子药材购于亳州 市各药房，经亳州市食品药品检验中心牛静中药师鉴定，法 半夏为天南星科植物半夏 Pinellia ternata (Thumb．) Breit 干 燥块茎的炮制加工品，麻黄为麻黄科植物草麻黄 Ephedra sinica Stapf 的干燥草质茎，白芍为毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall．的干燥根，炙甘草为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch．干燥根和根茎的炮制加工品，桂枝为樟科植物 肉桂 Cinnamomum cassia Presl 的干燥嫩枝，干姜为姜科植物 姜 Zingiber officinale Ｒosc．的干燥根茎，五味子为木兰科植物 华中五味子 Schisandra sphenanthera Ｒehdet Wils．的干燥成熟 果实，均符合中国药典 2015 年版规定。小青龙颗粒(每袋装 13g，四川泰乐制药有限公司，批号分别为 171021、171107、 180112、180323、180417、180510)。水为超纯水，乙腈为色谱 纯(Fisher 公司)，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Agilent Zorbax C18(100 mm×2．1 mm，1．8 μm);流动相:乙腈(A)-0．1%磷酸溶液(B)，梯度洗脱(0 ～ 8 min，15% →22%A;8～10 min，22%→25%A;10～15 min，25%→35%A;15 ～20 min，35%→50%A;20 ～ 23 min，50%→60%A;23 ～ 24 min， 60%→15%A;24～25 min，15%A);流速:0．5 ml·min－1 ;检测波 长:0～8 min，214 nm;8～ 15 min，237 nm;15 ～ 20 min，285 nm; 20～25 min，250 nm。柱温:35℃;进样量:1 μl。

2．2 混合对照品储备液的制备

精密称取各对照品适量(甘草酸重量 = 甘草酸铵重量/ 1．020 7)，置 50 ml 量瓶中，加甲醇超声( 250 W，40 kHz) 30 min，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即配制成含琥珀酸 68．40 μg·ml －1 、盐酸麻黄碱129．00 μg·ml －1 、盐酸伪麻黄碱 85．60 μg·ml －1 、芍药苷290．40 μg·ml －1 、甘草苷162．40 μg· ml －1 、甘草酸117．40 μg·ml －1 、桂皮醛58．80 μg·ml －1 、6-姜辣 素98．80 μg·ml －1 、五味子醇甲114．20 μg·ml －1 的混合对照 品溶液，备用。

2．3 供试品溶液的制备

取本品约1．0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲 醇 25 ml，称定重量，超声处理(250 W，40 kHz)30 min，放冷 称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，经0．22 μm的微孔 滤膜滤过，备用。

2．4 阴性样品溶液的制备

按照小青龙颗粒的处方比例及制备工艺，分别制备不含 法半夏、麻黄、白芍、炙甘草、桂枝、干姜、五味子的阴性样品， 按“2．3”项下方法分别制备阴性样品溶液。

3 讨论

在以甲醇体系作为流动相时，洗脱效果不理想，结果中 干扰峰较多，且难以除去，因此本试验考虑以乙腈为流动相， 参考文献，分别考察了水-乙腈、水-乙腈-冰醋酸、乙腈0．1%磷酸。结果显示水-乙腈作为流动相时，盐酸麻黄碱与 盐酸伪麻黄碱分离效果较差，且杂质峰较多，在酸性体系中 有较大改善;以水-乙腈-冰醋酸为流动相时，在波长 214 nm 处待测成分峰面积变小，波长 250 nm 及 280 nm 段基线漂移 较明显，这可能是冰醋酸最大吸收波长在 214 nm 附近，小于 250 nm 及 280 nm;磷酸溶液在 UPLC 中本底吸收较小，因此 以乙腈-0．1%磷酸作为流动相时，杂质峰较少，待测成分的洗 脱效果及峰型亦最佳。按中国药典 2015 年版和文献测定各成分时采用的波 长进行测定，结果显示在 210 nm 段琥珀酸、盐酸麻黄碱、盐 酸伪麻黄碱的峰检测有干扰，噪音较大，使用 214 nm 时 3 种 成分有较好吸收效果，末端吸收影响较小;237 nm 处芍药 苷、甘草苷、甘草酸均有较大响应值;285 nm 同时满足 6-姜 辣素、桂皮醛检测要求且效果最佳。最终确定琥珀酸、盐酸 麻黄碱、盐酸伪麻黄碱检测波长为 214 nm，芍药苷、甘草苷、 甘草酸检测波长为 237 nm，6-姜辣素、桂皮醛检测波长为 285 nm，五味子醇甲检测波长为 250 nm。采用波长切换法保 证了 9 种活性成分达到最佳吸收。