利用昆山超声提取器测定赶黄草醇提物中4种成分

赶黄草，又名扯根菜，为虎耳草科扯根菜属植 物扯根菜( Penthorum chinense Pursh) 的干燥地上部 分。民间以其全草入药，性温、味甘、无毒，具清 热、利尿、解毒、活血、平肝、健脾、祛黄疸等功效。

现代研究表明赶黄草在保肝、护肝方面功效显 著，其清热解毒，保肝退黄的功效与其所含化学 成分密不可分，其中黄酮类、没食子酸和槲皮素等 成分均被证明具有抗肝炎病毒和保护肝组织的作 用。为了保证赶黄草的质量，需建立可靠的质 量评价方法。目前评价赶黄草的方法多采用单一 成分含量的测定。然而中药疗效为多成分、多中 心、多靶点综合作用的结果。因此单一成分评价赶 黄草的内在质量有失偏颇。为较全面地评价赶黄 草药材的品质，采用高效液相色谱法同时测定赶黄 草中有机酸类、黄酮类和黄酮苷类代表成分没食子 酸、芦丁、槲皮素和乔松素的含量，以期为赶黄草的 质量控制提供理论和实验依据。

U3000 UPLC 超高效液相色谱系统、Chromeleon 7 数 据 处 理 器: Thermo Fisher Scientific company; FW177 型中草药粉碎机: 天津市泰斯特仪器有限公 司; AE400 电子天平: 瑞士梅特勒; KQ400 超声提取 器: 江苏昆山市超声仪器有限公司。 磷酸( 分析纯) : 国药集团化学试剂有限公司; 乙醇( 色谱纯) : 默克股份两合公司; 乙腈( 色谱纯) : 默克股份两合公司; 水为自制超纯水。对照品: 没 食子酸( 供含量测定用，批号: Y19M8C36143，) 、乔 松素( 供含量测定用，批号: 715 － 200111) : 均购自 上海源叶生物科技有限公司; 芦丁( 供含量测定用， 批号: 110715 － 201006) 、槲皮素( 供含量测定用，批 号: 110715 － 201006) : 购自中国食品药品检定研究 院。赶黄草样品购自浙江省立同德医院中药房，由 浙江省立同德医院李洪玉研究员鉴定为虎耳草科 扯根菜属植物赶黄草。

色谱柱: 资生堂 Capcell Pak C18 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ; 流动相: 乙腈 － 0. 1% 磷酸水; 柱温: 30 ℃ ; 检测波长 254 nm; 流速: 1. 0 mL / min; 进样体积 10 μL; 梯度洗脱程序见表 1。

2. 2 混合对照品溶液的制备

精密称取没食子酸、 芦丁、槲皮素和乔松素对照品适量，置5 mL 容量瓶， 加甲醇制成 1. 0 g /L 的对照品溶液。 2. 3 供试品溶液的制备 将药材粉碎，过 20 目筛， 精密称取赶黄草粉末 0. 5 g，置 25 mL 锥形瓶中，精 密加入 95% 乙醇 20 mL，浸泡 1 h，超声提取 30 min ( 功率 450 W，频率 28 kHz) ，放冷，用 95% 乙醇定容 至 25 mL，摇匀，0. 22μm 滤膜过滤，取续滤液，即得。 2. 4 方法学考察 2. 4. 1 线性考察 取没食子酸、芦丁、槲皮素和乔 松素混合对照品储备液，加甲醇逐级稀释，制成 5 个 不同浓度梯度对照品溶液。按方法与结果“2. 1”项 下色谱条件进样，以对照品浓度( g /L) 为横坐标，峰 面积对数值为纵坐标，得 4 种成分的线性方程。结 果表明没食子酸、芦丁、槲皮素和乔松素在线性范 围内，进样量与峰面积线性关系良好，线性方程、线 性范围、检测限和定量限结果见表 2。

2. 4. 2 精密度试验

取“2. 2”项下对照品溶液，按 方法与结果“2. 1”项下色谱条件在同一天连续进样 6 次，计算日内精密度，结果没食子酸、芦丁、槲皮素和乔 松 素 峰 面 积 ＲSD 分 别 为 0. 31% 、0. 39% 、 0. 53% 和 0. 41% 。按方法与结果“2. 1”项下色谱条 件连续进样3 d，计算日间精密度，结果没食子酸、芦 丁、槲皮素和乔松素峰面积 ＲSD 分别为 0. 39% 、 0. 45% 、0. 56% 和 0. 63% ，表明仪器精密度良好。

取同一批赶黄草样品( 四川 20170918) 6 份，按“2. 3”项下制备，按方法与结果 “2. 1”项下色谱条件进样，计算得没食子酸、芦丁、 槲皮 素 和 乔 松 素 峰 面 积 ＲSD 分 别 为 1. 35% 、 1. 31% 、1. 54% 和 1. 38% ，结果表明此方法重复性良好。

取按“2. 3”项制备的供试品 溶液，按方法与结果“2. 1”项下色谱条件分别在 0、 2、4、6、8、12、24 h 各进样一次，计算得没食子酸、芦 丁、槲皮素和乔松素峰面积 ＲSD 分别为 0. 35% 、 0. 31% 、0. 61% 和 0. 37% ，结果表明供试品溶液在 24 h 内稳定。

取同一批赶黄草样品( 四 川 20170918) 6 份，按“2. 3”项下制备分别精密加入 等倍的对照品，按“2. 1”项下色谱条件进样，计算加 样回收率，见表 3。没食子酸、芦丁、槲皮素和乔松 素的 平 均 回 收 率 分 别 为 98. 26% 、101. 16% 、 103. 25% 和 98. 34% ，ＲSD% 均小于 2. 0% 。

3 讨论

3. 1 指标性成分的确定

选择含量相对较高，在有机酸类和黄酮类中具有代表性的的 没食子酸、芦丁、槲皮素和乔松素作为含量测定指标。

3. 2 波长的选择

采用紫外全波段扫描法，对赶黄 草醇提样品、赶黄草混合标准品进行全波长扫描， 发现醇提样品和混合标准品在相同的出峰时间处， 在 220 nm 下均具有最强吸收，观察色谱峰形和基质 效应后，发现在 254 nm 下峰形较好，基线平稳，出峰 较多，因此选择 254 nm 作为检测波长。

中药成分提取方法众 多，且提取效果不尽相同。本实验为快速有效的提 取赶黄草中的有效成分，采用最为常见的超声提取 法，以没食子酸、芦丁、槲皮素和乔松素为指标性成 分，比较 50% ，75% 和 95% 乙醇作为溶剂对指标性 成分的影响，结果 95% 乙醇作为溶剂指标性成分含量最高。