数控浴式超声仪得细胞生物学改变使用

材料与方法

CKX41 倒置荧光显微镜（Olympus）； VICTOR X5 型 酶标仪（Biotek 公司）；KQ⁃100DE 型 数控浴式超声仪（江苏省昆山市超声仪器有限公司）；1⁃15K冷冻台式离心机（德国Sigma公司）；流式 细胞仪FACS VantageTM（美国Becton Dickinson公司）。将细胞以每孔 5 × 103 个的密 度，接种于 96 孔板中，37 ℃、5% CO2 培养箱培养 24 h 后，加入含不同浓度雌激素（0、0.5、1、5、10、 100 nmol/L）培养基，每组设 5 个复孔。继续培养 24 h 后，弃旧培养基，每孔加入 10 μL 5 mg/mL 的 MTT 溶液和100 μL无血清DMEM/F12培养基，培养 箱中孵育 4 h。

结果

使用不同浓度 的雌激素处理 MCF⁃10A 和 MCF⁃12A 细胞 24 h，结 果显示，0 ~ 10 nmol/L 的雌激素浓度可以促进细胞 的增殖，并且 5 nmol/L 为最佳促进浓度。 与空白组相比较，雌激素组中细胞的活性显著高，同时 8⁃OHdG 和 LDH 水平明显上升，即细胞毒性和 DNA 氧化损伤增高，但细 胞凋亡水平反而降低，差异均有统计 学意义（P < 0.01）。另外氧化应激是 DNA 损 伤的重要原因之一。而氧化酶能抑制氧化应激 清除产生的 ROS，保护细胞免受损伤。Nrf2 作 为细胞氧化应激反应的关键调控因子，调控 HO⁃1 和 NQO1 等氧化酶的表达，维持氧化还原稳态，消除致癌物质。本研究结果显示，雌激素可以 刺激 MCF⁃10A 和 MCF⁃12A 细胞增殖，并且在一定 浓度范围内随浓度增加，增殖效果越明显。同时 雌激素能增强正常乳腺细胞迁移和克隆能力，降 低细胞凋亡水平，与 YAN 等的研究结果相一致。 ANWESHA 等通过雌激素诱导细胞后发现 8⁃ OHdG 的表达水平明显增高，确定雌激素可诱导 DNA 的氧化损伤，本实验研究也有相一致的结 果。研究结果进一步发现，雌激素能够促进 ROS 在胞内积累和抑制 SOD、GPX、CAT 和 TAC 等氧化 酶的活性，并调控 Nrf2 及其下游 HO⁃1 和 NQO1 的 表达，引起氧化应激，诱导细胞 DNA 的氧化损伤。

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