玉米黄质检测方法建议（昆山舒美KQ-400DB应用）

在天然食品中，产生不同颜色物质基本上可 以分成两大类：花青素和类胡萝卜素。大部分的 花青素是水溶性的，而类胡萝卜是脂溶性色素， 包括叶黄素类和胡萝卜素类两大类。叶黄素是一 种极为重要的天然类胡萝卜素，广泛存在于水 果、蔬菜、花卉与一些藻类的生物中，其中万寿 菊中含量最高，并且从万寿菊里提取叶黄素的方 法也比较普遍。

1 材料与仪器 

无水乙醇、正己烷、乙酸乙酯、甲醇：均 为分析纯，天津市永大化学试剂有限公司；正己 烷、乙酸乙酯，均为色谱纯：赛默飞世尔；叶黄 素微囊粉样品：晨光生物科技集团股份有限公司 提供；叶黄素、玉米黄质标准品，纯度≥ 97%： 购于 sigma 公司。 高效液相色谱仪 E2695：沃特世有限公司；数控超声波清洗器 KQ-400DB：昆山市超声仪器有限公司；万分之一天平 AUW220：日本岛津公司。 

2 实验方法 

2.1 仪器方法的建立 

色谱柱：Welch Ultimate SiO2，4.6mm×250 mm，粒度 5μm，流动相：正己烷∶乙酸乙酯 = 70 ∶ 30，柱温：28℃，流动相流速：1.5mL/min， 进样量：20μL，检测波长：446nm。 

2.2 标准溶液的配制 

分别称取约 1mg（精确至 0.1mg）叶黄素和 玉米黄质标准品至 100mL 容量瓶内，用流动相 溶解，并定容至刻度，配制成 10μg/mL 标准储备 液，临用前用流动相进行稀释，放 4℃冰箱进行 保存。

2.3 样品的前处理 

准确称取 0.05 ～ 0.07g（精确至 0.0001g）样 品至 100mL 容量瓶中，加入 5mL 水，超声使其 溶解，移液管移取 10mL 甲醇于该容量瓶中，摇匀，加 50mL 流动相至该容量瓶内，轻轻摇匀， 10% 无水硫酸钠溶液定容，摇晃 1min（200 次 / min），暗放静止 15min，取上层清液进行液相检 测。

3 结果与分析

叶黄素微囊粉选取水作为溶解液，分别加 入不同量的水，然后按照 2.3 步骤进行试验，研 究水的加入量影响，分别加入水 5mL、10mL、 15mL、20mL、25mL，结果显示加水 10mL 时条 件最佳。称样加入 5mL 水超声溶解后，加甲醇，增大乳化效应，对甲醇加入量做了优化对比，，分 别 对 5mL、10mL、15mL、20mL、25mL 进 行 验证，测定结果加 10mL 甲醇效果最佳。美国药典 USP 提供类似的制剂方法中，加水 溶解后使用乙酸乙酯萃取，但使用乙酸乙酯溶剂 效应较大，影响峰型，对结果有影响，本方法选 取使用与流动相正己烷∶乙酸乙酯 =70 ∶ 30，溶 剂效应较小，检测精度较高，因此选择流动相正 己烷∶乙酸乙酯 =70 ∶ 30 作为萃取剂。

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