板蓝根颗粒中2种关键抗病毒成分的含量分析

板蓝根颗粒是由中药板蓝根(Isatis indigotica Fort.)经水提、醇沉等工艺制备的中成药产品，具 有清热解毒、凉血利咽之功效，用于肺胃热盛引 起的咽喉肿痛、口咽干燥，对急性扁桃体炎有很 好的治疗效果。板蓝根是国家重点推荐发展的品 种。现代研究发现，板蓝根具有抗病毒、降血脂、 降血糖、修复肝损伤和抗氧化等药理作用，含 有生物碱、木质素、核苷类、有机酸、多糖等多 种药效成分，其中(R,S)-告衣春为代表的生物碱 类成分和以直铁线莲宁B为代表的木质素类成分， 已被证明有明显的抗病毒活性。

1 仪器与试剂

Agilent 1260 高效液相色谱仪(美国 Agilent 公 司)，色谱柱为 Agilent ZORBAX SB-C18 色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 µm)；KQ-600VDB 型双频数超声波自动清洗器(昆山舒美超声仪器有限公司)； MILLI-Q Direct 8 纯水仪(美国密理博)；BT214D 型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公 司)；CP225D 型电子分析天平(德国赛多利斯)。 直铁线莲宁 B 对照品为实验室从板蓝根药材 中分离纯化得到的高纯度单体，并经过紫外光谱(UV)、质谱(MS)、核磁共振(NMR)等鉴定其结构， 利用 HPLC 峰面积归一化法检测其纯度，纯 度>99%；(R,S)-告衣春对照品(中国食品药品检定 研究院，批号：111753-201706；纯度：100.0%)； 板蓝根颗粒(白云山和记黄埔中药有限公司，规格： 每袋 10 g；批号：D18F019，K18A010，K18A008)； 甲醇(分析纯，广州化学试剂厂)，甲醇(色谱纯， 默克)；水为超纯水。

2 方法与结果

采 用 Angilent ZORBAX SB-C18 色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 µm)；流动相为甲醇(A)-水(B)， 梯度洗脱(0~3 min，3%B；3~25 min，3%→10%B； 25~27 min，10%→25%B；27~45 min，25%B；45~ 50 min，90%B)；流速 0.8 mL·min1 ；紫外检测器， 波长 224 nm；柱温 30 ℃；进样量 10 µL。取直铁线莲宁 B 对照 品，精密称定，加 50%甲醇制成每 1 mL 含 31.8 µg 的溶液，即得。取(R,S)-告衣春对照品，精密称定， 加 5%甲醇制成每 1 mL 含 23.9 µg 的溶液，即得。 2.2.2 供试品溶液的制备 取板蓝根颗粒适量， 研细，精密称定 1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入 5%甲醇 10 mL，称定质量，超声提取 5 min，再用 相同浓度的甲醇补足丢失质量后，过滤，取续滤 液 25 mL，过 0.45 µm 微孔滤膜，即得。用稀释倍数法制成含(R,S)- 告衣春 2.39，4.78，11.95，23.90，35.85，47.80 μg·mL 和含直铁线莲宁 B 3.18，6.36，15.90，31.80，47.70， 63.60 μg·mL的混合对照溶液。分别精密吸取系 列浓度的对照品溶液 10 µL，按照“2.1”项下色谱 条件测定，记录峰面积。以峰面积为纵坐标(y)，对照品浓度为横坐标(x)绘制标准曲线，并进行线 性回归。结果表明，(R,S)-告衣春和直铁线莲宁 B 在各自的浓度范围内，呈良好线性关系。

3 讨论

用 DAD 检测器对(R,S)-告衣春和直铁线莲宁 B 对照品溶液在 190~400 nm 进行紫外扫描发现， (R,S)-告衣春在 240 nm 处有最大吸收，直铁线莲宁 B 在 224 nm 和 276 nm 处有最大吸收。为同时实 现 2 个指标成分的准确定量，本实验考察了 230， 254，280 nm 等检测波长对定量结果的影响，发现 230 nm 处 2 个指标成分均有较高的响应值，且基 线稳定，干扰较小。故选择 230 nm 为检测波长。本实验考察了回流提取、超声提取对提取率 的影响，发现两者提取率相近，从操作简便考虑， 选择超声提取；考察了提取溶剂水、5%甲醇、10% 甲醇、20%甲醇、50%甲醇对提取率的影响，发现 无明显差别，但部分样品的水提取液不易通过微 孔滤膜(已考察了 0.22 µm 和 0.45 µm 的聚醚砜、 聚丙烯、尼龙微孔滤膜)，推测可能是水提液中某 些黏性成分造成的，亦或是某些样品中辅料成分 带来的影响；同时考察了 60，30，10，5 min 不同 提取时间对提取率的影响，发现没有明显差别， 也考察了 5 min 内的提取效果，发现结果明显偏低 且无规律性，推测可能是因提取不充分造成。因 此，从操作简便快捷、经济环保、结果稳定可靠 的角度考虑，选择 5%甲醇超声提取 5 min。