跌打丸中非法染色剂金橙Ⅱ检测方法的改进

跌打丸是由三七、当归、白芍、赤芍、桃仁、红花、血竭等 24 味中药饮片经粉碎、蜜制而成的大处方蜜丸制剂，收 载于《中华人民共和国药典》2015 年版一部。具有活血散 瘀，消肿止痛的功效，用于跌打损伤，筋断骨折，瘀血肿痛， 闪腰岔气等。组方中的红花被检出非法染色剂事件已 有报道，而金橙Ⅱ就是常用的染色剂之一。金橙Ⅱ又名酸 性橙Ⅱ、二号橙、桔黄橙、酸性金黄Ⅱ或酸性艳橙 GR，俗名 金黄粉，是一种化工染料，主要用于皮革、纺织物染色。

1 材料与方法

1.1 样品来源

在甘肃省 2018 年评价性抽验工作中，共收到省内 16 个县跌打丸样品（市、区）24 批次，均为大蜜丸，被抽样单 位涉及经营单位 14 个，医疗机构 10 个，样品来自国内 4 家生产企业。

1.2 仪器与试药

岛津 UFLC -20ADXR 高效液相色谱仪 （日本岛津公司，PDA 检测器）；MS205DU 电子天平（上海梅特勒托利多仪器有限公司）；KQ 250DB 超声清洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）；Dura 12V 型超纯水机（美国 The Lab 泽拉布 公司）。金橙Ⅱ对照品购于中国食品药品检定研究院，批 号：111769-201302；乙腈为色谱纯试剂；水为本实验室制 备的超纯水；其余试剂均为分析纯。

1.3 检验依据

在国家食品药品监督管理总局药品检验补充检验方 法和检验项目批准件（2014005）的基础上，对洗脱条件进 行调整，最终实现跌打丸中金橙Ⅱ的检测。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱 Phenomenex Gemini C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流动相：0.02 mol/L 醋酸铵溶液（A）-乙腈（B），洗 脱梯度见表 1。流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL，检测波长： 484 nm；柱温：35 ℃。理论板数按金橙Ⅱ峰计算不低于 2 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密取金橙Ⅱ对照品适量，加乙醇制成每 1 mL 约含 金橙Ⅱ10 μg 的储备液；精密量取储备液 5 mL 于 100 mL量瓶中，加乙醇至刻度，混匀，即得对照品溶液（每 1 mL 含金橙Ⅱ0.465 0 μg）。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 阴性供试品溶液的制备

取本品 3 丸，剪碎，加 4.5 g 硅藻土，研匀，取约 4.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加 10 mL 乙醇，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz） 20 min，冷即至室温，取上清液过滤，滤液即得。

2.3.2 阳性供试品溶液的制备

因跌打丸中均未检出金 橙Ⅱ，所以采用标准加入法制备阳性样品，分别精密量取 阴性供试品溶液 1.0 mL 和对照品储备溶液 0.3 mL，混匀 即得。

2.4 专属性试验

精密量取对照品溶液、阳性供试品溶液和阴性供试品 溶液各 10 μL，分别按原标准色谱条件和本试验“2.1”项 下色谱条件进行测定。结果显示，本试验优化后的色谱条 件明显优于原标准色谱方法，而且阳性样品呈现与对照品 保留时间相同的色谱峰，无其他杂峰干扰，阴性样品则无 对照品相对应的色谱峰，见图 1。


3 讨论

本次抽检的跌打丸剂型均为大蜜丸，在前处理中比较 了加硅藻土和不加硅藻土的区别，结果发现不加硅藻土直 接乙醇超声处理 30 min 内样品呈现块状，不易分散；而加 入硅藻土能提前分散样品，大大减少样品溶液的沉淀时 间，上清液也比较容易过滤。考察了提取溶剂，尝试 70% 乙醇、乙醇、甲醇作为溶剂分别提取，结果表明用乙醇提取 最为完全。跌打丸组方药味多，各化学成分极性差别较大，按照 原标准洗脱条件进行洗脱难以分离。本实验参考文献， 分别考察了乙腈-水，乙腈-0.02 mol/L 醋酸铵溶液不同比 例，对梯度时间进行了研究调整，最终确定了本试验条件。中成药是以中药饮片为原材料加工的，所以中药饮片 是否染色也就关乎中成药的质量。本试验为生产企业测定 非法染色剂金橙Ⅱ的含量提供了参考依据。