丹参注射液对格列喹酮分析！！！

格列喹酮作为第二代磺脲类口服降糖药物，因 口服吸收快、作用时间短的特点而在临床上被广泛 使用，但是临床上存在低血糖发生的风险。丹参 因其活血化瘀、祛瘀止痛之功效常用于血瘀证的 治疗。丹参注射液和格列喹酮在临床上常用于糖尿 病及其并发症的治疗，但是丹参注射液对格列喹酮 药物代谢动力学参数是否有影响尚不清楚。本研究 考察了丹参注射液对格列喹酮在糖尿病大鼠体内血 药浓度的影响，建立原位在体肠循环动物模型研究 丹参注射液对格列喹酮在糖尿病大鼠体内肠吸收的 影响，观察丹参注射液对格列喹酮药物代谢动力学 参数及肠吸收特性的影响，为今后两药的临床合用 提供依据。

１ 材料

１．１ 试剂

丹参注射液（批号 １７０５０８３）：上海中西 制药有限 公 司；格 列 喹 酮 标 准 品（批 号 Ｄ０７Ｆ６Ｊ１）： 上海源叶生物科技有限 公 司；链 脲 佐 菌 素（ｓｔｒｅｐｔｏ－ ｚｏｔｏｃｉｎ，ＳＴＺ；批 号 ＥＺ２９２１Ｂ４００）：美 国 Ｓｉｇｍａ 公 司；格列喹酮 片（糖 适 平，批 号 １１４０６３７）：北京 万 辉 双鹤药业有限责任公司；甲醇、乙腈（色谱纯）：天津市大茂化学试 剂 厂；水 为 Ｍｉｌｌ－Ｑ 超纯 水；其 余 试 剂 均为分析纯。

１．２ 仪器

ＨｙｐｅｒｓｉｌＢＤＳＣ１８色谱柱：大连依利特 公司；Ｗｓｔｅｒｓ１５２９ 高效液相色谱仪：美 国 Ｗａｔｅｒｓ 公司；２２０－Ａ 型数显电热恒温干燥箱：上海阳光实验 仪器有限公司；KQ2200型超声波清洗器：昆山舒美超声仪器有限公司；ＴＧ１６－ＷＳ台式高速离心机：长沙 湘仪离心机仪器有限公司；ＺＸＺ－Ｚ型循环水式真空 泵：河南一恒仪器有限公司。

１．３ 动物

健 康 ＳＤ 大鼠 ２０ 只，雌 雄 不 限，ＳＰＦ 级，饲养环境温度为１８～２６ ℃，月龄１～２个月，体 质量（２２０±１０）ｇ，由安徽医科大学实验动物中心［动 物生产许可证号：ＳＣＸＫ（皖）２０１７－００１；动物 使 用 许 可证号：ＳＹＸＫ（皖）２０１７－００６］提供。

２ 方法

２．１ 糖尿病大鼠模型的制备

所有动物适应性喂 养１周后，模型复制前禁食１２ｈ（一般过夜禁食，不 禁水），ＳＴＺ按每 千 克 体 质 量６５ｍｇ的剂 量 一 次 性 腹腔注射，临用前用枸橼酸缓冲液（０．１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ ４．５）配制。７２ｈ后检测空腹血糖，空腹血糖浓度＞ １６．６ｍｍｏｌ／Ｌ即为模型复制成功。

２．２ 色谱条件

Ｈｙ－ ｐｅｒｓｉｌＢＤＳＣ１８（４．６ｍｍ×２００ｍｍ，５μｍ）；流动相： 乙腈－水（６５∶３５），过滤 并 脱 气；流 速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ； 检测波长：２９４ｎｍ；柱温：２５ ℃；进样量：２０μＬ。

２．３ 样品的处理方法

精密吸取大鼠血浆２００μＬ， 加入１ｍＬ二氯甲烷，涡旋混匀２ｍｉｎ后，４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取二 氯 甲 烷 层，５０ ℃氮气 吹 干，加 入 ２００μＬ甲醇复溶，涡旋混匀２ｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心 １０ｍｉｎ后，取上清液２０μＬ进样。 精密吸取人工肠液样品（Ｔｙｒｏｄｅ液）２００μＬ， 加入１ｍＬ二氯甲烷，涡旋混匀２ｍｉｎ后，４０００ｒ／ｍｉｎ 离心 １０ ｍｉｎ，取 二 氯 甲 烷 层，５０ ℃ 氮 气 吹 干，加 入 ２００μＬ流动相复溶，涡旋混匀２ｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心 １０ｍｉｎ后，取上清液２０μＬ进样。

２．４ 药物代谢动力学研究

选 取１２只糖 尿 病 大 鼠，随机分为格列喹酮组和丹参－格列喹酮组。格列 喹酮组单独灌胃给予１５ｍｇ／ｋｇ（按照人与大鼠等效 剂量比值６倍换算，相当于药品说明书建议成人每 日临床剂量２．５ｍｇ／ｋｇ）的格列喹酮混悬水溶液；丹 参－格列喹酮组先腹腔注射２ｍＬ／ｋｇ（药品说明书建 议成 人 每 日 临 床 剂 量 ０．５ｇ／ｋｇ）的 丹 参 注 射 液 ５ ｍｉｎ后，灌胃 给 予１５ ｍｇ／ｋｇ的格 列 喹 酮 混 悬 水 溶 液。两组均在给予格列喹酮后０．５、１、１．５、２、２．５、 ３、４、６、８ｈ经眼眶取血０．３ｍＬ血样，所取血样分别 置于１．５ｍＬ涂有肝素钠的微型离心管中，静置３０ ｍｉｎ后，在４０００ｒ／ｍｉｎ下离心１０ｍｉｎ，取上层血浆 ２００μＬ，按“２．３”项下操作，记录峰面积，计算血药浓 度，并绘制平均血药浓度－时间曲线图。

２．５ 肠吸收实验

将糖尿病ＳＤ 大鼠（禁食１２ｈ、自由 饮 水）随 机 分 为 两 组（格 列 喹 酮组和丹参－格列喹酮组），每组４只，称质量后腹腔 注射１０％水合氯醛（３．５ｍＬ／ｋｇ），麻醉后固定并维 持体温，沿腹中线打开腹腔，暴露小肠，两组大鼠均 选取全肠段（选取肠段标准如下：十二指肠自幽门１ ｃｍ 处开始向 下，盲 肠 上 行 １０ｃｍ 止），肠段 两 端 切 口，用预 热 至３７ ℃的生理盐水将肠内容物冲洗干 净，切口两端分别插管，结扎固定。伤口处用浸有生 理盐水脱脂棉覆盖保湿，保温３７ ℃。以１０μｇ／ｍＬ 格列喹酮－Ｔｙｒｏｄｅ灌注 液４０ｍＬ 进行 肠 循 环 灌 注， 流速为０．２ｍＬ／ｍｉｎ，待灌注液充满整个循环通路 时记为０时刻，循环灌注１８０ｍｉｎ后结束，期间每隔 ２０ｍｉｎ取循环液１ｍＬ 并检测其中格列喹酮含量。 丹参－格列喹酮组在１０μｇ／ｍＬ格列喹酮－Ｔｙｒｏｄｅ液灌 注前５ｍｉｎ，经尾静脉注射丹参注射液（２ｍＬ／ｋｇ），再 按上述方法 进 行 实 验，两组均设置空白大鼠对照。 

3 结果

格列喹酮单独灌胃以及与丹参注射 液合用后其药物代谢动力学过程在糖尿病大鼠体内 均符合一室模型。结果表明，在与丹参注射液合用后， 格列喹酮在糖尿病大鼠体内的药物代谢动力学参数 发生了显著的改变。达峰 时 间 从２．７０ｈ缩短 到 了 ２．０８ｈ；最 大 药 物 浓 度 从 ６．３５μｇ／ｍＬ 增 加 到 了 ２４．１４μｇ／ｍＬ，大约提高了３．８倍，差异有统计学意义 （Ｐ＜０．０５）；药－时曲线下面积从３７．３５ｍｇ／（Ｌ·ｈ）提 高至８９．４２ ｍｇ／（Ｌ·ｈ），差 异 有 统 计 学 意 义 （Ｐ＜ ０．０５）；并且清除率大约缩小了２倍，差异有统计学 意义（Ｐ＜０．０５）。与格列喹 酮 组 相 比，丹 参－格列喹酮组的吸收速 率 Ｋａ从（８．５３±１．２９）×１０－３／ｓ增加 到（２１．３９± ７．４７）×１０－３／ｓ；Ｐａｐｐ从（１．８２±０．２２）×１０－８ｃｍ／ｓ 增加到（４．３５±１．３５）×１０－８ｃｍ／ｓ；丹参－格列喹酮组 的 Ｋａ 和 Ｐａｐｐ 值 显 著 增 加，差 异 有 统 计 学 意 义 （Ｐ＜０．０５）。这表明丹参注射液可以促进格列喹酮 在糖尿病大鼠体内的吸收。

４ 讨论

格列喹酮与丹参注射液合用后能显著增加格列 喹 酮 的ｃｍａｘ 、ＡＵＣ，显 著 缩 短ｔｍａｘ ，显 著 减 少Ｃｌ。丹参注射液可以显著 增 加 格 列 喹 酮 在 糖 尿 病 大 鼠 体 内的 Ｋａ和 Ｐａｐｐ。这可能是丹参中某些成分影响 格列喹酮的吸收、分 布、代 谢 和 排 泄 过 程。肠 道 外 排载体和血流速度 可 能 是 影 响 药 物 口 服 吸 收 的 因 素。有研究 表 明，丹 参 酮 Ⅰ 为丹参的有效成分之 一，可 以 抑 制 以 地 高 辛 为 底 物 的 Ｐ－糖 蛋 白 （Ｐ－ ｇｌｙｏｃｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐ－ｇｐ）转运。